利用分离型内含肽DnaE表达抗菌肽

• 作者: 余晓岚 刘敏 孙斌 张晨瑶 王飞 马立新
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽 NpuDnaE SspDnaE 反式剪接 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 克隆与表达研究专栏
• 页码范围: 354-360
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.92
• 字数: 3107字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2017.04.005

摘要

拟验证天然断裂内含肽Npu DnaE、Ssp DnaE的反式剪接反应对嵌合蛋白形成的影响,探讨依据此方法表达抗菌肽的可行性,规避抗菌生物表达中对宿主的毒害作用.将花蝉属抗菌肽ADP-1(Amblyomma defensin peptide 1)拆分为N端和C端两部分,其N端与断裂型内含肽Npu DnaE的N端融合,C端与Ssp DnaE的C端融合,并分别构建到原核表达载体pET-23a(Amp+)和pET-30a(Kan+)上,获得重组表达质粒pET-23a-ADP-1-N-Npu和pET-30a-Ssp-ADP-1-C,然后单独或共转化大肠杆菌感受态细胞BL21.实验结果表明,两个重组质粒分别单独或组合转化至Bl21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测转化的菌株中都表达了目的蛋白,共转化的菌株诱导表达破菌后其上清液有抑菌活性.该实验验证以两种天然断裂型内含肽Ssp DnaE和Npu DnaE及搭载的ADP-1 N端和C端可在大肠杆菌中获得表达,且共转化的两段内含肽可在离体上清中发生反式剪接,促进融合在内含肽上的ADP-1两部分形成完整具有抑菌活性产物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张晨瑶		1	0	0.0	0.0
2	刘敏		1	0	0.0	0.0
3	王飞		1	0	0.0	0.0
4	孙斌		1	0	0.0	0.0
5	马立新		1	0	0.0	0.0