2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定

• 作者: 倪华 吴倩倩 孙卫平 张剑 李超龙 潘秀珍 王长军 范伟伟
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 2型猪链球菌 丝状温度敏感蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 250-255
• 页数: 6页
• 分类号: R378.1
• 字数: 4186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.03.011

摘要

目的 制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性.方法 从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因sz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析.重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性.结果 成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性.结论 成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长军		134	625	12.0	17.0
2	范伟伟	中国药科大学中药学院	1	0	0.0	0.0
6	倪华		3	3	1.0	1.0
7	孙卫平		1	0	0.0	0.0
8	张剑		2	0	0.0	0.0
9	李超龙		1	0	0.0	0.0
10	吴倩倩		2	0	0.0	0.0