特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤模型小鼠坏死性凋亡的影响及作用

• 作者: 孔蕾 彭亚力 熊成 胡敏
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 特异性阻断剂 坏死性凋亡 缺血-再灌注损伤 视网膜
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 914-917,921
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1
• 字数: 4759字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2017.0232

摘要

目的 探讨特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)模型中坏死性凋亡的影响及作用.方法 取60只野生型C57小鼠随机分为实验组、对照组及空白组.每组20只.在进行Nec-1对坏死性凋亡影响研究中,空白组15只小鼠不做任何处理,实验组15只小鼠给予玻璃体内注射2 μL Nec-1 (2 mol·L-1)预处理,对照组15只小鼠无预处理;预处理4h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型;再灌注损伤后3d,每种检测方法各取5只小鼠分别于取材后行Western blot、免疫荧光定量PCR、免疫荧光染色,检测以下基因mRNA和蛋白的表达变化:IL-13、IL-6、TNF-α、RIP3、RIP1及Caspase-8.在进行Nec-1对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的影响研究中,实验组、对照组及空白组各5只小鼠纳入荧光金标记.空白组小鼠荧光金标记后不做任何处理.荧光金标记7d后,实验组小鼠给予玻璃体内注射2μL Nec-1(2 mol·L-1)预处理,对照组无预处理.预处理4h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型.再灌注损伤后3d,收集视网膜组织行铺片RGC计数研究.结果 与对照组相比,实验组RIP3、RIPI的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(均为P ＜0.001);IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达亦均明显降低,差异均有统计学意义(均为P＜0.001);Caspase-8的表达变化不明显,与对照组相比差异无统计学意义(P =0.654 8).通过Western blot检测发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低,其变化趋势与RIP3 mRNA水平的变化基本一致.通过视网膜切片免疫荧光染色检测亦发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低.实验组全视网膜铺片中每个视野下荧光金逆行标记RGC数(197.3±3.6)较对照组(107.5±6.1)明显增多,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 实验性RIRI模型中,Nec-1能阻断坏死性凋亡,并显著增加RGC数.