磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体

• 作者: 冯一然 廖飞 杨晓兰 种慧敏
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 多抗 突变体 最大吸附活性 预测 磁珠
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法研究
• 页码范围: 753-757,767
• 页数: 6页
• 分类号: Q599
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201705027

摘要

目的 考察磁珠固定多抗吸附细胞裂解液中酶/突变体,分析吸附酶活性对样品蛋白量响应曲线预测最大吸附活性(Vs)用于比较识别阳性突变体的可靠性.方法 纯化重组表达大肠杆菌碱性磷酸酶(ECAP)及绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(PAAS)为免疫原;兔抗血清用33％硫酸铵分级和DEAE-纤维素层析纯化得多抗.磁珠羧基活化后固定多抗;用对硝基酚显色底物,碱终止后测定405nm吸收增量反映酶活性;分析吸附响应曲线预测Vs.结果 多抗磁珠吸附酶的容量约2.0mg/g磁珠.ECAP比活性超过PAAS比活性70倍.ECAP突变体R168K较野生型比活性提高约50％,用2.5μg多抗磁珠反应10min即可预测Vs识别此阳性突变体;用PAAS突变体G138S为起始酶,用10μg多抗磁珠测定吸附酶反应20min后吸收预测Vs,能识别活性提高20％以上的PAAS弱阳性突变体.结论 只要被吸附酶活性能可靠测定,优化磁珠固定多抗的用量能预测低活性酶/突变体Vs进行比较识别阳性突变体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖飞	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	44	223	8.0	12.0
2	杨晓兰	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	48	181	8.0	11.0
3	种慧敏	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0
4	冯一然	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0