胸椎黄韧带骨化患者韧带细胞成骨潜能的评估及相关高通量测序分析

• 作者: 孙垂国 宁尚龙 曾岩 李危石 苗军 范东伟 陈仲强 马信龙
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 关键词: 胸椎 黄韧带 骨化,异位性 序列分析
• 年，卷（期）: 2017,（20）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1300-1309
• 页数: 10页
• 字数: 8393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2017.20.008

摘要

目的 评估胸椎黄韧带骨化患者韧带细胞的成骨潜能,并采用转录组高通量测序进一步分析差异基因表达.方法 选择2015年10月至2016年4月入院的10例胸椎黄韧带骨化患者(骨化组)与10例不伴胸椎黄韧带骨化的胸椎疾病患者(非骨化组),术中收集黄韧带标本行细胞培养,采用Flexcell FX-4000细胞应力加载系统对细胞施加周期性牵张应力来诱导成骨并检测两组细胞成骨指标的表达,再各纳入3例样本进行基因测序分析.结果 碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性染色镜下观察染色细胞数和面积半定量分析,以及ALP活性定量检测结果显示骨化组表达在0h明显高于非骨化组(t=5.757,5.141,2.358,P＜0.05),且随诱导成骨而增加,其中定量检测及染色面积的差异有统计学意义(F=6.464,P=0.003;F=17.35,P=0.000).Real-time PCR结果显示骨化组ALP、骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及骨钙素(Osteocalcin,OCN)的表达水平在0h、12h和24 h几乎均高于非骨化组,且随诱导成骨而增加,除BMP-2和OCN在12h外差异均有统计学意义.Western Blot结果显示各指标在两组的表达与Real-time PCR结果类似.而在各项检测中非骨化组各指标的表达均无明显变化.高通量测序结果显示骨化组出现671个上调基因和314个下调基因.在得到的基因本体功能分析(gene ontology terms,GO terms)中可发现22个上调基因富集到的与成骨相关的GO terms.结论 胸椎黄韧带骨化韧带细胞具有较高的成骨潜能,并明显表达成骨相关基因.差异表达基因L1RL1、PTHLH、DKK1、BMP6、SPP1和FGF1等可能与TOLF的成骨紧密相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗军	天津市天津医院脊柱外科	57	395	11.0	17.0
2	马信龙	天津市天津医院脊柱外科	143	1253	18.0	28.0
3	宁尚龙	天津市天津医院脊柱外科	4	31	3.0	4.0
7	陈仲强	北京市北京大学第三医院骨科	1	2	1.0	1.0
8	范东伟	北京市北京大学第三医院骨科	1	2	1.0	1.0
9	孙垂国	北京市北京大学第三医院骨科	1	2	1.0	1.0
10	曾岩	北京市北京大学第三医院骨科	1	2	1.0	1.0
11	李危石	北京市北京大学第三医院骨科	1	2	1.0	1.0