微小RNA-29 b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制

• 作者: 姜贻乾 安素红 徐小平 管晓翔 苏芳 谷建钟 郭庆敏 鲍艳红 黄常新
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNAs 乳腺肿瘤/病理生理 慢病毒属 转染 聚合酶链反应 细胞增殖 肿瘤转移 肿瘤细胞,培养的
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 乳腺癌分子医学专题
• 页码范围: 349-356
• 页数: 8页
• 分类号: R737.9
• 字数: 5343字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2017.08.02

摘要

目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制.方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-29b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞 MCF-7.通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况;实时定量PCR 检测miRNA-29b的表达水平;CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化.采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选,使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证.对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响.结果:成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体.感染乳腺癌细胞MCF-7后,lenti-miRNA-29b组和空载体转染组分别有90%和60%左右的细胞出现绿色荧光;lenti-miRNA-29b组miRNA-29b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加(均P<0.05),MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱(均P<0.05).RTKN的基因编码3'UTR区中具有miRNA-29b的结合位点;野生型RTKN-WT-3'UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降(P<0.05).转染siRNA-RTKN后,MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降,细胞增殖和迁移能力显著减弱(均P<0.05).结论:miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力.