免疫磁珠及无血清悬浮培养法对肝癌干细胞的分离与富集

• 作者: 刘俊 李波 陈克霏
• 来源期刊: 中国普外基础与临床杂志
• 关键词: 肝癌干细胞 免疫磁珠分选 流式细胞术 无血清悬浮培养
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 946-952
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1007-9424.201611088

摘要

目的 评估免疫磁珠分选技术分选肝癌干细胞的效率.方法 ①CD90的表达检测:采用免疫组织化学染色SP法检测8例正常肝组织、58例肝癌及其癌旁组织中CD90的表达.②细胞系筛选:将Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Be17402细胞系分为空白对照组和实验组(细胞数量均为5.5×105个,均为1孔),实验组细胞中加入5μLCD90-PE抗体,空白对照组加入5μL CD90-无荧光抗体.采用流式细胞术检测4种细胞系空白对照组和实验组的CD90+细胞比例,以筛选细胞.③免疫磁珠分选:将Huh-7和MHCC97-H细胞系分别进行磁珠标记后进行磁珠分选.收集流经磁珠分选柱(MS)后的细胞悬液1 mL,作为CD90-组;将MS移出磁场区域,加入1 mL PBS缓冲液快速冲洗至离心管中,标记为CD90+组;以未分选细胞作为空白对照组(加入CD90-无荧光抗体)和未分选实验组(加入CD90-PE抗体).对Huh-7细胞系进行二次分选.采用流式细胞仪检测4组细胞中的CD90+细胞比例.④无血清培养和含血清培养:将Huh-7细胞接种到无血清培养基专用6孔板中进行培养(无血清和含血清悬浮培养均为l孔),1周后采用流式细胞仪检测无血清培养和含血清培养后细胞中的CD90+细胞比例.结果 ①正常肝组织中CD90的表达阳性率为0(0/8),肝癌组织为65.5％ (38/58),癌旁组织为20.7％(12/58).肝癌组织中CD90的表达阳性率较正常肝组织(x2=6.78,P＜0.05)和癌旁组织高(x2=20.83,P＜0.05).②Huh-7、MHCC97-H、SMMC-7721及Be17402细胞系中实验组的CD90+细胞比例分别为0.851％、1.090％、2.710％及4.050％,空白对照组分别为0.241％、0.688％、1.890％及2.080％,故选择Huh-7和MHCC97-H细胞系进行下一步的免疫磁珠分选.③Huh-7细胞经一次分选后:未分选空白对照组的CD90+细胞比例为0.241％,未分选实验组为0.851％,CD90-组为0.574％,CD90+组为1.100％;二次分选后:未分选空白对照组的CD90+细胞比例为0.032％,未分选实验组为0.961％,CD90-组为0.426％,CD90+组为9.700％.结论 正常肝组织实质细胞不表达CD90,肝癌组织高表达CD90.肝癌细胞系Huh-7和MHCC97-H中存在少量的CD90+细胞,免疫磁珠分选法能明显提高CD90+细胞比例,但作用十分有限.无血清悬浮培养法对富集CD90+细胞无明显作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李波		247	1271	17.0	24.0
2	陈克霏		21	23	3.0	3.0
3	刘俊		30	165	6.0	11.0