自体垂直悬吊牵引与靶向调控caspase3对兔退变椎间盘细胞的影响

• 作者: 佟德民 冯福盈 孙凤杰 孙利群 梁健宁 谭滴清
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 椎间盘退变 细胞凋亡 牵引
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1072-1077
• 页数: 6页
• 分类号: R681.5
• 字数: 4437字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2017.12.09

摘要

目的 探讨自体垂直悬吊牵引与靶向调控caspase 3对兔退变椎间盘细胞凋亡的影响.方法 体外实验:分离培养兔椎间盘髓核细胞,进行caspase3 siRNA和阴性对照siRNA转染,分别置于血清饥饿培养基中培养6h和48h,设正常细胞和血清饥饿细胞对照,应用RT-qPCR法和流式细胞术Annexin V法分析caspase3mRNA表达和细胞凋亡情况.体内实验:将35只新西兰大白兔随机分为模型组(n=10)、阴性siRNA对照组(n=l0)、caspase3 siRNA组(n=10)和caspase3siRNA牵引组(n=5),采用16G针刺损伤腰椎椎体右前侧纤维环制备椎间盘退变模型;后3组按照造模入路用26G针头从造模对侧分别注入阴性对照siRNA或caspase3 siRNA转染复合体至兔髓核中心,模型组不予处理.48h后前3组每组随机选取5只实验兔,处死取髓核组织,提取总RNA,采用RT-qPCR和Western blotting分析退变椎间盘内caspase3mRNA和蛋白表达情况;同时caspase3 siRNA牵引组再行自体垂直悬吊牵引,30min/d,连续2周后处死获取髓核组织,采用ELISA检测髓核内TNF-α和IL-1β表达情况,HE染色观察组织形态学变化.结果 Caspase 3 siRNA转染后兔髓核细胞caspase3mRNA表达水平明显降低,在饥饿培养条件下细胞凋亡明显减少(P＜0.05).椎间盘退变模型兔在纤维环穿刺注入caspase3 siRNA后,椎间盘髓核内caspase3mRNA和蛋白表达明显下调;2周后caspase3 siRNA牵引组TNF-α和IL-1β表达与模型组和阴性siRNA对照组比较显著减少(P＜0.05),但与caspase3 siRNA组比较差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色显示caspase3 siRNA牵引组椎间盘内活细胞和细胞外基质明显增多,胶原纤维排列整齐.结论 自体垂直悬吊牵引和靶向调控caspase3能有效阻止细胞凋亡的发生,延缓早期椎间盘退变.