dusp1敲降对低温诱导斑马鱼ZF4细胞凋亡的作用

• 作者: 储旭 牛虹博 程鹏丽 胡春兰 胡鹏 陈良标
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 双特异性磷酸酶 慢病毒 shRNA ZF4细胞 凋亡 低温胁迫
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 995-1002
• 页数: 8页
• 分类号: S917
• 字数: 4821字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2017.16358

摘要

为了研究双特异性磷酸酶(dual-specificity phosphatase 1,duspJ)基因与鱼类低温诱导的细胞凋亡之间的关系,本研究经EcoRI和Age1酶切构建plko.1-dusp1-shRNA1,plko.1-dusp 1-shRN A2,plko.1-negative control(nc),plko.1-EGFP的重组质粒,并分别与慢病毒包装质粒pCMV-DR8.9.1、pCMV-VSVG共同转染至293T细胞中,经293T细胞包装的病毒,感染斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryos fibroblast like cell line,ZF4),RT-PCR检测表明dusp1成功被敲降.经嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞系,将细胞于28℃培养(正常对照组)或经10℃低温处理10d,使用annexin V-FITC/Propidium lodide(PI)双色标记流式细胞术检测ZF4细胞凋亡情况.结果显示:低温胁迫下dusp1敲降的细胞凋亡(dusp 1-shRNA1敲降,dusp 1-kd1;dusp 1-shRNA2敲降,dusp 1-k d2)比例较nc组显著上调,其中早期凋亡和晚期凋亡细胞比例dusp 1-kd1显著高于nc组,并且dusp 1-kd1活细胞数显著低于nc组(P＜0.05),进一步证明dusp1参与鱼类冷应激过程,并在低温情况下保护细胞.该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定了基础,其中dusp1基因沉默型斑马鱼细胞在10℃低温处理10d凋亡数显著大于对照组,证明duspJ在细胞凋亡信号通路中起到重要调控作用,为低温下研究斑马鱼基因的分子机制提供新的思路.