STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究

• 作者: 侯卫坤 周艳 张英 李琰清 江山娇 王博 王林玉 蔡永松
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光素酶 报告基因 JNK-STAT信号通路 STAT3
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1108-1113
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5383字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2017.11.005

摘要

目的 构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统并检测STAT3活化能力,为筛选STAT3活性调控相关药物提供实验基础. 方法 基因合成STAT3反应元件序列,退火形成含酶切位点的双链DNA,内切酶XhoⅠ和HindⅢ双酶切报告基因载体pGL6-TA,T4 DNA连接酶将STAT3反应元件插入pGL6-TA载体多克隆位点,将该载体转染HeLa细胞,G418筛选STAT3荧光素酶报告基因稳定表达的单克隆HeLa细胞株.5,10,20 ng/ml不同浓度激动剂IL-6和20,40,80 μmol/L抑制剂S3I-201刺激单克隆HeLa-STAT3-Luc细胞,检测荧光素酶对应的发光值验证STAT3荧光素酶报告基因检测系统的检测能力. 结果 测序和比对结果显示,STAT3荧光素酶报告基因系统pGL6-STAT3-Luc中STAT3反应元件序列正确;G418成功筛选出稳定表达STAT3荧光素酶报告基因的单克隆HeLa细胞株;5,10和20 ng/ml浓度IL-6可刺激HeLa-STAT3-Luc细胞中荧光素酶的活性显著升高(P＜0.00l),且分别升高5.4,10.3和20.0倍;不同时间点检测1 ng/ml和5 ng/ml浓度IL-6刺激HeLa-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性呈现线性增长趋势;40 μmol/L和80 μmol/L浓度的抑制剂S3I-201与10 ng/ml浓度IL-6共刺激HeLa-STAT3-Luc细胞,其荧光素酶的活性显著降低(P＜0.001),STAT3活化的抑制率分别为18.9％和43.7％. 结论 成功构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统,该系统具有有效检测STAT3活化水平的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王博	西安交通大学第一附属医院转化医学中心	93	249	8.0	12.0
3	侯卫坤		9	35	4.0	5.0
4	蔡永松	西安交通大学第一附属医院骨科	4	19	2.0	4.0
5	张英	西安交通大学第一附属医院消化内科	21	103	5.0	10.0
6	周艳	西安交通大学第一附属医院皮肤科	42	142	7.0	8.0
9	王林玉	西安交通大学第一附属医院转化医学中心	1	3	1.0	1.0
13	江山娇	西安交通大学第一附属医院转化医学中心	1	3	1.0	1.0
17	李琰清	西安交通大学第一附属医院检验科	1	3	1.0	1.0