正常宫颈上皮细胞原代培养体系的改良

• 作者: 智艳芳 李肖甫 李雅 樊婷婷 荣守华 邱翠
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 原代培养 宫颈上皮细胞 中性蛋白酶 角质细胞无血清培养基
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 应用研究
• 页码范围: 370-375
• 页数: 6页
• 分类号: R711.74
• 字数: 4905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2017.03.032

摘要

目的:探索一种高效、可重复的正常宫颈上皮细胞原代培养方法.方法:取60例正常宫颈组织,分成2组,分别采用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA(中性蛋白酶联合法)及Ⅰ型胶原酶消化分离后进行原代培养,比较两种分离效果;观察采用中性蛋白酶联合法消化不同时间对分离效果的影响.观察添加体积分数5%FBS dK-SFM培养基与单纯dK-SFM培养基培养原代宫颈上皮细胞的生长曲线差异,并用形态学、广谱角蛋白免疫细胞化学染色鉴定细胞来源.结果:正常宫颈上皮细胞原代培养总成功率为40%.中性蛋白酶联合法成功率、分离所得细胞密度、原代细胞融合时间及细胞纯度均高于Ⅰ型胶原酶消化法(P<0.05).中性蛋白酶消化20 h的分离效果优于消化16和24 h(P<0.05).体积分数5%FBS dK-SFM培养基原代培养的宫颈上皮细胞增殖活性高于单纯dK-SFM培养基(P<0.05).细胞生长状况良好,可在体外传代至5~6代,并可冻存与复苏,免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性.结论:Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25 g/mL胰蛋白酶-EDTA分离法和体积分数5% FBS dK-SFM培养基培养原代正常宫颈上皮细胞,高效、可重复性好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李肖甫	郑州大学第三附属医院细胞室	49	391	10.0	17.0
2	智艳芳	郑州大学第三附属医院细胞室	23	192	9.0	13.0
3	荣守华	郑州大学第三附属医院细胞室	30	188	8.0	12.0
4	邱翠	郑州大学第三附属医院细胞室	8	102	5.0	8.0
5	李雅	郑州大学第三附属医院细胞室	18	61	5.0	7.0
6	樊婷婷	郑州大学第三附属医院细胞室	5	22	3.0	4.0