田菁茎瘤固氮根瘤菌ORS571类T3SS效应蛋白的预测、原核表达及相关功能分析

• 作者: 刘华伟 张俊彪 张磊 谢秒秒
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 田菁 Ⅲ型分泌系统 效应蛋白 茎瘤固氮根瘤菌
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 461-469
• 页数: 9页
• 分类号: S188
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.03.013

摘要

根瘤菌Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)效应蛋白在固氮结瘤及决定根瘤菌的宿主范围等方面具有重要作用.为了对田菁(Sesbaniac annab ina)茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans)ORS571的类T3SS效应蛋白进行预测、表达和相关功能分析,本研究利用生物信息学软件BPBAac和Effective T3对ORS571的全蛋白组进行分析,并结合相关文献报道获得了7个效应蛋白,分别是AZC0308、AZC_0649、AZC_0667、AZC_ 2699、AZC_ 2928、AZC_3165和AZC 4087;设计并合成具有相应酶切位点的特异性扩增引物,利用PCR获得了以上7个效应蛋白的全基因序列;以pMAL-c4x作为原核表达载体,成功构建了7种重组表达载体,通过优化诱导表达条件获得了可溶性高的融合蛋白;随后利用Amylose Resin亲和层析对表达的融合蛋白进行纯化,获得了较高纯度的融合蛋白;以辣根过氧化物酶标记抗麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)单克隆抗体作为一抗进行Western blot检测,结果表明,7种效应蛋白高效正确表达.构建AZC 2928基因缺失的ORS571突变体并侵染小麦(Triticumaestivum)小偃22,结果表明,AZC 2928基因对小麦的生长具有抑制作用.研究结果为今后从茎瘤固氮根瘤菌ORS571类T3SS效应蛋白方面研究根瘤菌与非豆科植物的共生固氮提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张磊	西北农林科技大学动物医学院	115	400	10.0	16.0
2	刘华伟	西北农林科技大学生命科学学院	13	97	7.0	9.0
3	张俊彪	西北农林科技大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0
4	谢秒秒	西北农林科技大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0