rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

• 作者: 刘滨 唐凯 孙园园 李少玉 毕宏生 郭大东 陈美清
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: rno-miR-30b-5p 荧光素酶质粒载体 白细胞介素-10 Toll样受体4 葡萄膜炎
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 330-334
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1
• 字数: 5358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2017.0083

摘要

目的 探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用.方法 构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3'UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将mo-miR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测mo-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况.结果 双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P＜0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P＜0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3'UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展.本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕宏生	山东中医药大学眼科研究所	162	541	10.0	12.0
2	孙园园		10	30	3.0	4.0
3	郭大东	山东中医药大学眼科研究所	37	165	7.0	10.0
4	刘滨		12	28	3.0	4.0
5	陈美清		4	10	2.0	3.0
6	李少玉		4	16	3.0	4.0
7	唐凯	山东中医药大学眼科研究所	12	70	5.0	8.0