hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63细胞OPG/RANKL系统表达的影响

• 作者: 叶云金 李生强 葛继荣 许惠娟 谢丽华 陈娟 陈赛楠
• 来源期刊: 中国骨质疏松杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hsa-miR-655 心肌营养素样细胞因子1 MG63细胞 OPG/RANKL 基因表达
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1409-1414
• 页数: 6页
• 分类号: R336
• 字数: 4545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2017.11.003

摘要

目的 探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-KBligand,RANKL)表达的影响.方法 通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验.实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化.结果 荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80％以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义(P=0.0004);CLCF1 mRNA水平未见明显变化(P =0.0986);过表达组OPG(P=0.0384)、RANKL(P=0.0007) mRNA均有所上调,差异具有统计学意义(P＜0.05);Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调(P =0.0053);与对照组比较,过表达组OPG(P=0.0021)、RANKL(P=0.0002)蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低(P=0.0078),差异具有统计学意义(P ＜0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值.