色素上皮衍生因子修饰的人脐带间充质干细胞构建方法

• 作者: 刘晓雷 姜舒 张芸 李结明 杨顺 纪惜銮 罗朝霞 谢亮 邹文文 闻慧
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 关键词: 色素上皮衍生因子 慢病毒载体 人脐带间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 实验论著
• 页码范围: 1226-1231
• 页数: 6页
• 字数: 5271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3980/j.issn.1672-5123.2017.7.07

摘要

目的:构建携带色素上皮衍生因子(pigment epithelial-derived factor,PEDF)基因的重组慢病毒,感染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUCMSCs),探讨PEDF在hUCMSCs中的表达及重组慢病毒对hUCMSCs活性的影响.方法:利用pLenti-CMV-hChR2-EYFP 载体系统,构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP,进一步感染hUCMSCs,获得携带PEDF基因的hUCMSCs(PEDF-hUCMSCs),激光共聚焦显微镜和ELISA法检测PEDF-hUCMSCs 的PEDF蛋白表达情况,采用CCK8法检测PEDF-hUCMSCs的活性.通过观察细胞形态和流式细胞术检测验证重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染hUCMSCs后对细胞传代、细胞表型的影响.结果:成功构建携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP,高效感染hUCMSCs,获得的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白,检测结果显示重组病毒感染组细胞与空白对照组细胞活性无统计学差异(P>0.05).重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP感染对hUCMSCs的增殖能力、细胞形态和细胞表型没有明显改变. 结论:携带PEDF基因的重组慢病毒pLenti-CMV-PEDF-EYFP修饰的PEDF-hUCMSCs能有效表达PEDF蛋白,为进一步探索应用PEDF-hUCMSCs治疗视网膜色素变性疾病奠定了实验基础和理论依据.