破骨细胞的传代、冻存与复苏

• 作者: 俞索静 吴承亮 童培建 肖鲁伟 胡雪琴 金红婷
• 来源期刊: 中国骨伤
• 关键词: 破骨细胞 培养 传代 冻存 复苏
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 463-469
• 页数: 7页
• 字数: 5661字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-0034.2017.05.014

摘要

目的:探讨破骨细胞传代、冻存与复苏的可行性,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法.方法:破骨细胞的传代:取成年SPF级雄性SD大鼠1只,体重250 g,腹主动脉采血,分离周围血单个核细胞,经RANKL、M-CSF诱导培养2周,形成多核破骨细胞后,采用胰蛋白酶消化、震荡、吹打法,制成细胞悬液,离心后用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔培养板与直径35 mm培养皿中.破骨细胞的冻存:取上述细胞悬液,离心后用DMSO、FBS、α-MEM (1:2:7)冻存液,按常规程序将细胞冻存于-196℃液氮中.破骨细胞的复苏:从液氮中取出冻存的破骨细胞,37℃水浴中快速解冻,加PBS离心清洗后,用含RANKL、M-CSF的α-MEM完全培养基重悬,接种至6孔细胞培养板与直径35 mm培养皿中.同时对传代与复苏培养中破骨细胞的消化与贴壁过程,采用倒置相差显微镜与活细胞工作站进行观察记录与动态成像,3d后作TRAP染色.结果:破骨细胞经胰蛋白酶消化、震荡、吹打后,细胞基本上脱壁、悬浮,可以制成细胞悬液,用于传代与冻存.破骨细胞传代培养后,大多在2h内开始贴壁,贴壁后胞内细胞核清晰可见.经液氮冻存的破骨细胞,复苏培养后2～3 h开始贴壁,胞质展开,可见多个细胞核.传代与冻存复苏培养后的破骨细胞,TRAP染色呈阳性反应.结论:破骨细胞虽然贴壁比较牢固,但经适当的消化、震荡及吹打,多数可脱壁悬浮,并能实现传代培养,同时还可采用常规方法进行细胞冻存与复苏培养,经传代与冻存的破骨细胞仍可保持破骨细胞的活性.破骨细胞的传代与冻存,可以按实验计划与用量需求,随时进行分量传代与复苏培养,为开展破骨细胞的相关研究提供新的技术手段与方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童培建	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	209	1896	23.0	32.0
2	肖鲁伟	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	164	1412	20.0	28.0
3	俞索静	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	19	133	7.0	11.0
4	吴承亮	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	49	383	11.0	17.0
5	金红婷	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	63	567	15.0	21.0
6	胡雪琴	浙江中医药大学浙江省骨伤研究所	13	27	4.0	4.0