高分辨率溶解曲线分析结合COLD-PCR快速检测绵羊低丰度FecB基因

• 作者: 李国忠 陈创夫
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 FecB基因 COLD-PCR 高分辨率熔解曲线分析
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧生物技术
• 页码范围: 122-126,131
• 页数: 6页
• 分类号: S826.2
• 字数: 3926字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2017-06-122

摘要

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为FecB基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术.实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子和阴性纯合子的基因组,分别PCR扩增223 bp的目的片段,测定浓度和纯度后,分别稀释至0.05 rg/μL,将阳性纯合子用阴性纯合子进行系列稀释作为模板标准品.根据模板标准品序列设计合成3对引物,以标准品为模板进行COLD-PCR,其产物进行高分辨率熔解曲线分析,生成的归一化温度转移差异图(Normlized and Temp-Shifted Differines Plot)即为标准曲线图,作为待测样品FecB检测的依据,对其可靠重复性做了进一步验证.结果表明:2对引物COLD-PCR HRM标准曲线图曲线分离清晰可靠,检测下限均为0.5％,与传统qPCR HRM相比,灵敏度提高到4倍.本实验建立的绵羊低丰度FecB基因检测方法可以用于绵羊FecB基因大面积高通量快速筛查工作.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈创夫	新疆石河子大学动物科技学院	24	169	8.0	12.0
2	李国忠	新疆石河子大学动物科技学院	1	4	1.0	1.0