猪伪狂犬病病毒直接免疫荧光检测方法的建立及初步应用

• 作者: 吴斌 彭忠 徐守兴 徐黎晖 赵婷婷 陈焕春
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪伪狂犬病病毒 单克隆抗体 荧光抗体 直接免疫荧光检测方法
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 993-997
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 3690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201703012

摘要

为建立一种快速、敏感、准确的猪伪狂犬病病毒(PRV)直接免疫荧光检测方法(DFM),本研究通过制备并纯化PRV gE蛋白单克隆抗体(MAb),将其标记异硫氰酸荧光素(FITC)后对荧光抗体的最佳工作条件进行摸索;并对荧光抗体的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行测定;应用DFM对从临床收集的83份疑似病料进行检测,同时用PCR检测作为对照,计算符合率.结果显示,本研究制备FITC标记抗体的F/P比值为2.578±0.012,符合标准;荧光抗体的最佳工作条件为:使用固定剂(60％丙酮+40％乙醇)于-20℃固定20 min,抗体工作浓度为15μg/mL,抗体孵育时间为1h;荧光抗体能在107病毒稀释度(1×TCID50)检出阳性信号,与PCV2、PPV、PRRSV、CSFV、PRV Bartha-K61均无交叉反应;批内和批间重复性良好,-20℃保存5个月染色后荧光强度仍稳定;83份临床样品检测结果显示,DFM与PCR的符合率为74.7％,其中淋巴结和扁桃体的符合率较高,分别为85.7％和93.3％.本研究建立的PRV直接免疫荧光检测方法为临床PRV检测和复合诊断奠定基础,适用于临床推广.