14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25B定位的影响

• 作者: 侯艳军 刘珊 孟峻 樊淑珍 韩艳秋
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 14-3-3ε Cdc25B 卵母细胞 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1080-1086,前插1-前插2
• 页数: 8页
• 分类号: Q954.43
• 字数: 6756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170603

摘要

目的:探讨14-3-3ε蛋白在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中对Cdc25 B定位的影响,为阐明14-3-3ε蛋白对小鼠卵母细胞发育的调控机制奠定基础.方法:采用超排卵方法获得3周龄昆明系雌性小白鼠生发泡(GV)期卵母细胞分为未注射组、control siRNA注射组和14-3-3εsiRNA注射组.构建pmax-FP-Red-HA-14-3-3ε表达载体.间接免疫荧光技术检测14-3-3ε蛋白和Cdc25 B在小鼠卵母细胞中的定位;直接免疫荧光技术观测14-3-3ε蛋白和Cdc25B蛋白在小鼠卵母细胞中的亚细胞定位;利用显微注射方法将14-3-3εsiRNA注射入GV期卵母细胞中,相差显微镜下观测卵母细胞的形态表现,计算卵母细胞的生发泡破裂(GVBD)发生率;Western blotting法检测卵母细胞中14-3-3ε蛋白的表达和Cdc2-pTyr15蛋白的相对表达水平;放射自显影检测卵母细胞中成熟促进因子(MPF)的活性.结果:间接和直接免疫荧光实验,野生型Cdc25 B能与14-3-3ε蛋白共定位于细胞质;在GVBD前期,Cdc25B由胞浆穿梭进入细胞核.当Cdc25B蛋白的第321位丝氨酸突变为丙氨酸时,14-3-3ε蛋白的表达水平降低,Cdc25B的胞浆定位被取消.未注射组、control siRNA注射组卵母细胞在显微注射24 h后均未发生GVBD,GVBD发生率组间比较差异无统计学意义(P>0.05);14-3-3εsiRNA注射组在显微注射后22和24 h卵母细胞的GVBD发生率均高于未注射组和control siRNA注射组(P<0.01),显微注射后24 h卵母细胞到达第2次减数分裂中期(MII)的比例高于未注射组和control siRNA注射组(P<0.01).结论:在小鼠卵母细胞减数分裂恢复过程中,Cdc25B的Ser321位点可能是14-3-3ε蛋白调控Cdc25B细胞内定位的具体作用位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩艳秋	内蒙古医科大学附属医院检验科	85	364	10.0	15.0
2	樊淑珍	内蒙古医科大学附属医院检验科	32	221	9.0	14.0
3	孟峻	内蒙古医科大学附属医院检验科	30	109	7.0	8.0
4	侯艳军	内蒙古医科大学附属医院检验科	6	14	2.0	3.0
5	刘珊	内蒙古医科大学附属医院检验科	14	44	4.0	6.0