14-3-3ε和Cdc25B在小鼠卵母细胞生发泡期阻滞中的作用

• 作者: 侯艳军 呼格吉乐 孟峻 张永梅 韩艳秋
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 14-3-3ε Cdc25B 卵母细胞 生发泡 生发泡破裂 显微注射
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 215-225
• 页数: 11页
• 分类号: Q954.43
• 字数: 5066字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160205

摘要

目的：研究14-3-3ε和Cdc25 B对小鼠卵母细胞生发泡（GV）期阻滞作用的影响，为阐明蛋白激酶A／Cdc25 B／14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞 GV 期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法：在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、 pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321A 和 pcDNA3.1-MYC-Cdc25 B-S321 D转录成mRNA。超排卵方法获得小鼠 GV期卵母细胞，实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA＋Cdc25 B-WT （野生型） mRNA共注射组、14-3-3εmRNA ＋Cdc25 B-S321 D （模拟磷酸化型）mRNA共注射组、14-3-3εmRNA＋Cdc25 B-S321 A （突变型） mRNA共注射组，收集各组母卵细胞后采用 Western blotting法检测外源性14-3-3ε和 Cdc25B蛋白表达及 Cdc2-Tyr15的磷酸化状态；相差显微镜观察卵母细胞的形态学变化并计数生发泡破裂（GVBD）率。结果：未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA＋Cdc25 B-WT （野生型） mRNA共注射组、14-3-3εmRNA ＋Cdc25B-S321D （模拟磷酸化型）mRNA共注射组在显微注射后20 h均未发生GVBD （P＞0.05）；14-3-3εmRNA＋Cdc25B-S321A （突变型）mRNA 共注射组在显微注射后1、2和3 h 卵母细胞的 GVBD 率分别为（5.00±0.68）％、（62.00±3.56）％和（100.00±0.00）％，显微注射后20 h到达第2次减数分裂中期（MII）的比例为（79.00±2.80）％，与未注射组和TE缓冲液注射组比较，GVBD率和到达 MII的比例均显著升高（P＜0.01）。结论：14-3-3ε通过Cdc25 B的321位丝氨酸磷酸化和脱磷酸化调控卵母细胞由 GV期向 GVBD的过渡。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩艳秋	内蒙古医科大学附属医院检验科	85	364	10.0	15.0
2	孟峻	内蒙古医科大学附属医院检验科	30	109	7.0	8.0
3	呼格吉乐	内蒙古医科大学附属医院检验科	30	41	3.0	5.0
4	侯艳军	内蒙古医科大学附属医院检验科	6	14	2.0	3.0
5	张永梅	内蒙古医科大学附属医院检验科	16	41	4.0	5.0