摘要:
目的 研究齐墩果酸在诱导SMMC-7721肿瘤细胞凋亡过程中对线粒体功能及能量代谢的影响.方法 取对数生长期细胞,分为空白对照组(0.01%二甲基亚砜)和3个浓度实验组(齐墩果酸,15,30,60 μmol·L-1).用齐墩果酸作用24 h,以CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测齐墩果酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;以Annexin Ⅴ-FITC双染法观察细胞凋亡;用JC-1染色检测线粒体膜电位;以酶联免疫吸附法测定线粒体呼吸链复合酶I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性;用比色法检测ATP酶活力和ATP水平;以免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达的变化.结果 齐墩果酸能显著抑制SMMC-7721肝癌细胞株增殖,低中高3个浓度对细胞的抑制率分别为(21.96±3.37)%,(55.62 ±3.45)%,(89.56 ±2.11)%,空白对照组为(3.45 ±0.17)%,与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01);齐墩果酸作用24h后,低中高3个浓度细胞总凋亡率分别为(18.43 ±2.16)%,(46.75 ±5.29)%,(72.03 ±4.07)%,与空白对照组的细胞总凋亡率为(2.18±1.11)%比较,差异有统计学意义(均P<O.01);低中高3个浓度齐墩果酸可降低线粒体膜电位,低荧光部分细胞所占百分比分别为(23.52±3.65)%,(67.45±5.12)%,(89.52±3.75)%,与空白对照组的(8.54±1.17)%比较,差异有统计学意义(P<0.01);在中高2个浓度齐墩果酸可显著抑制线粒体呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性,引起细胞内Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力降低,ATP水平下降.齐墩果酸可使Bcl-2表达减少,Bax表达增加,Cyt C在线粒体中表达降低而在胞浆中表达增加,cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3蛋白表达增加.结论 齐墩果酸能明显抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,可能与其影响线粒体功能和能量代谢有关.