小麦自噬相关因子ATG5的原核表达和抗血清制备

• 作者: 于宝佳 岳洁瑜 张加姿 李开心 王华忠
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 小麦 自噬相关因子ATG5 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 69-74
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0020

摘要

细胞自噬在植物生长发育和环境响应中扮演了重要角色,ATG5是参与自噬小体组装的核心因子之一.在前期工作中我们克隆了两个小麦ATG5基因TaATG5a和TaATG5b,并对其开展了初步的功能分析.鉴于后续基因功能研究中的免疫学方法涉及对特异性抗体的需求,通过载体构建、原核表达和亲和层析过程获得了TaATG5a的重组蛋白,经兔免疫过程制备了TaATG5a的抗血清,采用ELISA和Western杂交等方法鉴定了抗体的效价和特异性.结果表明,克隆于pET30a载体上的TaATG5a在大肠杆菌中能够被IPTG高效诱导表达,重组蛋白的表观分子量与理论值基本一致,表达量在诱导0-8 h范围内逐渐增加.纯化的重组蛋白纯度较高,满足抗体制备要求.制备的抗血清能特异性识别原核表达和小麦内源的TaATG5a,效价达到1:25600.此外,制备的抗血清通过Western杂交还能够识别共价连接的小麦ATG12-ATG5复合物,该复合物是小麦叶片中ATG5的主要存在形式.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华忠	天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室	19	124	7.0	10.0
2	岳洁瑜	天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室	9	22	3.0	4.0
3	于宝佳	天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室	3	2	1.0	1.0
4	李开心	天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室	3	2	1.0	1.0
5	张加姿	天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室	1	0	0.0	0.0