超声破碎及反复冻融收集脂肪间充质干细胞裂解液的最优条件

• 作者: 傅青春 周荣 孟凌玉 李洪超 李莉 王俊怡 王晓今 程明亮 金银鹏 陈成伟
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 脂肪干细胞 间充质干细胞 脂肪间充质干细胞 超声 反复冻融 细胞裂解液 细胞治疗 细胞外膜泡
• 年，卷（期）: 2017,（17）
• 所属期刊栏目: 脂肪干细胞
• 页码范围: 2631-2637
• 页数: 7页
• 分类号: R394.2
• 字数: 2421字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.17.002

摘要

背景:旁分泌在间充质干细胞治疗方面起主要作用.提取间充质干细胞裂解液,可以避免直接间充质干细胞本身所致栓塞、肿瘤以及免疫排斥反应等问题,然而目前提取间充质干细胞裂解液的方法存在差异.目的:比较超声破碎及反复冻融方法获得间充质干细胞裂解液的差异.方法:①从健康的人腹部皮下脂肪中分离出脂肪间充质干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞,胎牛血清培养基体外培养扩增,并采用流式细胞检测仪鉴定其常用表面标记;②采用反复冻融及超声细胞破碎2种破壁方法,将1×109 L-1,2×109 L-1,4×109 L-13种不同密度的细胞分别置于生理盐水与双蒸水中进行破碎,比较细胞破碎率及裂解液蛋白含量的差异.结果与结论:①通过体外分离人体脂肪组织,可获得脂肪间充质干细胞;②细胞裂解时,细胞浓度越高,破壁所需时间越长,而破碎时间越长,则细胞破碎率越大;③生理盐水中超声细胞破碎法得到的蛋白含量较其他条件高;④结果提示在生理盐水环境下使用超声方法提取脂肪间充质干细胞裂解液尤为有效,且推荐细胞浓度为4×109 L-1以内.