核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响

• 作者: 孙达权 徐国强 徐莹莹 李红梅 王筑婷 石松 莫晓川 雷霆雯
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 核不均一核糖核蛋白C2 细胞 细胞增殖 真核表达 脂质体 转染
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 专题研究1
• 页码范围: 626-630
• 页数: 5页
• 分类号: R361.3
• 字数: 3453字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.06.003

摘要

目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用.方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体pEGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力.结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成cD-NA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体pEGFP-C1中,成功构建真核表达载体pEGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加.结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖.