摘要:
目的 研究壁虎多肽混合物(GPM)对人肝癌SMMC7721细胞自噬的影响.方法 取对数生长期细胞种板,用不同质量浓度的GPM(0,0.04,0.06,0.09,0.14,0.20,0.30,0.45 mg·mL-1)处理SMMC7721细胞24 h,通过噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,根据MTT结果,分别作为正常组(0)、低中高3个质量浓度(GPM:0.1,0.15,0.22 mg·mL-1)实验组,对照组(西罗莫司40μg·mL-1).经单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察不同质量浓度GPM对SMMC7721细胞自噬的影响;免疫组化法检测细胞内Beclin1及LC3表达的变化;免疫印迹法检测细胞自噬标志物Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白的表达.结果 GPM可抑制SMMC7721细胞的增殖,并具有质量浓度依赖性,作用24h后其IC50值为0.16mg·mL-1.GPM处理SMMC7721细胞6h后,在胞质中可见大量自噬小泡的形成,在显微镜下呈亮绿色荧光.正常组、对照组、低中高3个质量浓度实验组Beclin1阳性细胞数占总细胞数的百分比分别为(15.70±0.26)%,(63.47 ±0.54)%,(17.09 ±0.37)%,(70.66±0.56)%,(78.48±0.68)%;与正常组相比,对照组与中高2个质量浓度实验组差异有统计学意义(均P <0.05).这5组LC3-阳性细胞数占总细胞数的百分比分别为(35.84±0.36)%,(82.41 ±0.82)%,(60.83±0.61)%,(69.66±0.70)%,(74.61 ±0.75)%,与正常组相比,各组差异均具有统计学意义(均P<0.05).这5组的Beclin1与β-actin灰度比值分别为(6.87±0.68)%,(11.26 ±0.87)%,(6.46±1.34)%,(11.58 ±0.95)%,(15.82±1.58)%;与正常组相比,对照组、中高2个质量浓度实验组差异有统计学意义(均P <0.05).这5组LC3-Ⅱ与β actin灰度比值分别为(26.70±0.41)%,(103.17 ±0.88)%,(30.29 ±0.52)%,(36.32±0.52)%,(64.34 ±0.48)%;与正常组相比,各组差异均具有统计学意义(均P<0·05).结论 壁虎多肽混合物能够影响人肝癌SMMCT721细胞自噬现象的发生,可能通过诱导其自噬而使细胞死亡.