HPLC-MS／MS检测血清25-羟维生素D方法的建立和基本性能评价

• 作者: 周慧 张曼 赵平
• 来源期刊: 检验医学与临床
• 关键词: 25-羟维生素D 液相色谱法 串联质谱法
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 180-183
• 页数: 4页
• 字数: 4259字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-9455.2017.02.011

摘要

目的：建立一种检测血清25‐羟维生素D2[25（O H ）D2]和25‐羟维生素D3[25（O H ）D3]的高效液相色谱串联质谱（HPLC‐MS／MS）方法，以用于常规临床评价维生素D水平。方法以稳定同位素标记的25（OH）D2‐d3和25（OH）D3‐d3作内标，血清标本和标准品采用饱和硫酸锌和乙腈沉淀血清蛋白，正己烷提取。采用 HPLC‐MS／MS技术进行分析，固定相为Poro‐shell 120 EC‐C18正向柱，电喷雾离子源（ESI），多反应监测模式（M RM ），干燥气温为275℃，干燥气流为10 L／min ，喷雾器压力为50 psi ，毛细管电压为5000 V。以甲醇（80％）和超纯水（20％）为流动相进行梯度洗脱，流速为0．5 mL／min ，柱温为50℃，质谱采用高温ESI ，以选择反应监测模式进行定量分析。结果25（OH）D2和25（OH）D3内标峰面积比与对应的水平线性相关系数均大于0．995，检出限（LOD）均为1．0 ng／mL ，定量限（LOQ）分别为2．0 ng／mL和1．5 ng／mL ，25（OH）D2批内和总变异系数分别为3．01％～5．23％和3．45％～8．72％，25（O H ）D3批内和总变异系数分别为1．78％～3．43％和2．19％～4．16％，准确度分别为105．4％和98．0％～104．9％，加样回收率分别为99．67％～103．92％和98．72％～104．04％。结论本研究建立的 HPLC‐MS／MS方法检测血清中25（OH）D2和25（OH）D3灵敏度高，准确性好，可用于常规临床评价维生素D含量。