大鼠睾丸支持细胞的分离培养及鉴定

• 作者: 任曼 周可柔 张倩 李升和 胡倩倩 靳二辉 顾有方
• 来源期刊: 安徽科技学院学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大鼠 支持细胞 分离培养 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S852.16
• 字数: 4102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19608/j.cnki.1673-8772.2017.0459

摘要

目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞.方法:选用18～22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25％ 胰酶和0.1％ Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15 min、10 min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃ 、5％CO2培养箱中进行培养,24 h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80％ 进行传代培养.显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定.结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95％ 以上.结论:缩短两步酶消化时间,培养24 h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量.