利用大肠杆菌高效制备人端粒酶逆转录酶抗原肽

• 作者: 刘国强 张雅雯 张鸿 李泽民 李黄金 祝贺 赵林 郭土敬
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人端粒酶逆转录酶 抗原肽 大肠杆菌 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 223-227
• 页数: 5页
• 分类号: Q555
• 字数: 3348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2018010203

摘要

目的 利用大肠杆菌基因工程系统建立人端粒酶逆转录酶hTERT抗原肽的高效制备方法.方法 利用抗原表位预测软件SYFPEITHI、BIMAS与EpiJen确定截短表达策略,通过ProtScale软件亲水性分析改善表达产物的可溶性.目的基因克隆于表达载体pET21b,高浓度尿素裂解法溶解包涵体蛋白,稀释复性法复性.结果 3个覆盖全长hTERT的截短片段仅Ser480-Leu665能高效表达,但所形成的包涵体蛋白难溶于8 mol/L尿素.进一步优化所获的Tyr562-Ile665包涵体蛋白则可溶,且经纯化后可有效复性,产物纯度达到95％以上.结论 利用大肠杆菌系统成功建立了hTERT抗原肽高效制备方法,为后续肿瘤疫苗的开发应用奠定了基础.