外源性一氧化碳释放分子2对脂多糖刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制

• 作者: 丁盛 孙炳伟 宋明明 李平
• 来源期刊: 中华重症医学电子杂志（网络版）
• 关键词: 脓毒症 一氧化碳 中性粒细胞 吞噬 凋亡
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 354-362
• 页数: 9页
• 字数: 7235字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2096-1537.2018.04.012

摘要

目的 探讨外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)对脂多糖(LPS)刺激人中性粒细胞杀菌功能的调控作用及其机制.方法 采集1名健康成年志愿者的静脉血,分离出中性粒细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L CORM-2组、LPS+50 μmol/LCORM-2组、LPS+无活性CORM-2 (iCORM-2)组.正常对照组不进行任何处理;LPS组采用1 μg/ml的LPS刺激;LPS+10 μmol/L CORM-2组、LPS+50 μmol/L CORM-2组、LPS+iCORM-2组在采用上述相同剂量LPS刺激的同时,分别采用10 μmol/L CORM-2、50 μmol/L CORM-2、50μmol/L iCORM-2进行干预,常规培养1h后检测相关指标.用琼脂糖趋化模型检测中性粒细胞的趋化功能,流式细胞仪检测细胞颗粒释放及吞噬功能,酶联免疫吸附试验(ELISA)监测中性粒细胞颗粒释放功能的改变,蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路蛋白Akt磷酸化的表达水平.以上指标均重复测定3次,对数据行单因素方差分析、SNK检验.结果 正常对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L CORM-2组、LPS+50 μmol/L CORM-2组、LPS+iCORM-2组细胞的趋化距离分别为(2241.33±67.30)、(919.00±55.02)、(1784.33±17.79)、(2202.33±91.69)、(1000.00±55.02) μm,LPS组细胞趋化距离较正常对照组明显降低(P＜0.01);LPS组和LPS+iCORM-2组细胞的迁移距离较正常对照组明显降低(P＜0.05);LPS+10 μmol/LCORM-2组和LPS+50 μmol/L CORM-2组细胞迁移距离较LPS组明显增加(P＜0.01);LPS+iCORM-2组细胞细胞迁移距离与LPS组相近(P＞0.05).对于中性粒细胞四级颗粒的释放研究,LPS刺激后中性粒细胞的颗粒释放均发生了明显的增加,而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后,中性粒细胞的颗粒释放均得到明显抑制(P＜0.01);使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞颗粒释放与LPS组相近(P＞0.05).用LPS刺激后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较正常对照组升高(P＜0.05);而使用10 μmol/L与50 μmol/L CORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度较LPS组明显增高(P＜0.01);使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞Phagocytosis平均荧光强度为与LPS组相近(P＞0.05).LPS刺激后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与正常对照组相近(P＞0.05);而使用10 μmol/L与50 μmol/LCORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值较正常对照组、LPS组明显增高(P＜ 0.05);使用50 μmol/L iCORM-2干预后中性粒细胞蛋白Akt磷酸化与总Akt比值灰度扫描值比值与LPS组相近(P＞0.05).结论 CORM-2干预可以明显增加LPS刺激后中性粒细胞的早期凋亡,恢复中性粒细胞的趋化功能,并促进中性粒细胞的吞噬功能.CORM-2调控LPS刺激后中性粒细胞凋亡与吞噬功能,其机制可能与CORM-2促进磷酸化Akt有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李平	南京医科大学附属苏州医院消化营养中心	18	54	5.0	6.0
2	孙炳伟	南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科	13	7	1.0	1.0
3	宋明明	南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科	4	2	1.0	1.0
4	丁盛	南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科	2	1	1.0	1.0