摘要:
目的 研究麦角甾苷对大鼠骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响及机制.方法 密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓基质细胞并鉴定,细胞随机分为高、中、低浓度实验组和对照组,分别用100,50,25和0 mol·L-1的麦角甾苷干预培养.培养24,4,72 h后,用细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖情况.培养24,48,96h后进行碱性磷酸酶活性检测,72 h后进行碱性磷酸酶染色.以蛋白质印迹法(Western blot)及实时聚合酶链式反应(Real time PCR)分别检测成骨相关蛋白及基因表达情况.结果 培养72 h后,高剂量实验组骨髓基质细胞增殖能力为1.22±0.05,低于对照组的1.50±0.09,差异有统计学意义(P<0.05).培养24,48,96h后,高、中、低浓度实验组碱性磷酸酶表达量较对照组增加,差异均有统计学意义(均P <0.05).培养72 h后,碱性磷酸酶染色结果显示,高、中、低浓度实验组培养皿颜色均深于对照组.Western blot检测结果显示,高、中、低浓度实验组骨形态发生蛋白2(BMP2)、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05),而各剂量实验组间差异无统计学意义(P>0.05).Real time PCR检测结果显示,高、中、低浓度实验组BMP2、Smad1、Smad5、Smad8、Runx2、Osterix基因表达均高于对照组(P<0.05),而各浓度实验组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 麦角甾苷对体外培养的大鼠骨髓基质细胞增殖并无显著影响,并可以通过BMP2-Smads-Runx2-Osterix通路促进BMSCs成骨分化.