摘要:
目的 研究冰片对体外培养大鼠血视网膜屏障通透性影响及其作用机制.方法 获取大鼠视网膜血管内皮细胞(REVC),经原代培养并鉴定.大鼠REVC经胰酶消化后接种于铺有层黏连蛋白的Transwell小室中,培养15 d后成功建立REVC紧密连接屏障模型.将紧密连接屏障模型分为2组:实验组(加入冰片血清)和对照组(加入空白血清),用跨上皮细胞电阻测量仪测定2组在0,12,24h这3个时间点的跨上皮细胞电阻(TER)值;以逆转录-聚合酶链反应法检测2组的紧密连接相关蛋白ZO-1 mRNA表达水平.结果 在12 h的TER值:实验组与对照组分别为(159.24 ±3.51),(269.53±5.86)Ω×cm2,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);但在24h,组间差异无统计学意义(P>0.05),表明加入冰片血清12 h后,大鼠REVC间紧密连接间隙增大,紧密连接开放,导致TER值降低,24 h后紧密连接恢复正常,TER值恢复到0h水平,表明冰片具有开放体外培养的大鼠REVC间紧密连接的作用.在12 h的ZO-1 mRNA值:实验组与对照组分别为0.47±0.39,0.80±0.02,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);但在24 h,组间差异无统计学意义(P>0.05),表明加入冰片后,大鼠REVC的紧密连接相关蛋白ZO-1 mRNA值表达减少,而后逐渐增加,在24 h恢复到0h的水平.表明冰片可以下调大鼠REVC的紧密连接相关蛋白ZO-1mRNA表达水平,降低紧密连接相关蛋白ZO-1蛋白的表达.结论 冰片可在转录水平上减少紧密连接相关蛋白ZO-1 mRNA表达,能够开放大鼠REVC间的紧密连接,增加血视网膜屏障的通透性.