碱胁迫应答基因GsSnRK1.1与上游调控因子GsGRIK1互作功能分析

• 作者: 丁晓东 于洋 孙晓丽 朱娉慧 朱延明 杜建英 殷奎德 王子君 陈超
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 野生大豆 碱胁迫 GsSnRK1.1 GsGRIK1 蛋白互作
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-11
• 页数: 11页
• 分类号: S565.1|Q945.78
• 字数: 6954字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2018.06.001

摘要

研究针对野生大豆蛋白激酶GsGRIK1与GsSnRK1.1相互作用是否参与植物响应碱胁迫,采用生物信息学、分子生物学以及基因工程等技术手段开展系统研究.首先作碱胁迫应答基因GsSnRK1.1和GsGRIK1全长基因克隆功能验证,证明其有显著耐碱功能;构建酵母表达载体PYX212和PYX242,利用酵母四重突变株(sak1/tos3/elm1/snf1 )作表型分析.结果表明,共转化GsSnRK 1.1和GsGRIK 1的转化子可在非葡萄糖碳源和碱胁迫处理的选择培养基上正常生长.由此证明野生大豆GsSnRK1.1受上游调控因子GsGRIK1激活调控,且发现其可能参与植物耐碱胁迫应答机制.通过Western blot体外生化分析,证明上游调控因子GsGRIK 1通过钙离子依赖途径磷酸化激活GsSnRK1.1.利用组织染色法,对GsSnRK1.1和GsGRIK 1作碱胁迫下表达模式分析,结果表明, GsSnRK1.1和GsGRIK1基因表达显著响应碱胁迫.通过碱胁迫处理过量表达GsSnRK1.1和GsGRIK1大豆毛状根,作功能表型鉴定,结果表明,共表达GsSnRK1.1和GsGRIK1的大豆毛状根耐碱能力最显著.研究首次阐明GsGRIK1通过钙离子依赖途径磷酸化调控GsSnRK1.1参与碱胁迫应答通路,为完善碱胁迫应答通路奠定重要基础.