摘要:
目的 研究6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase-3,PFKFB3)、1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine 1-phosphate receptor 2,S1P2)在2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中的表达,并探讨叔丁基对苯二酚(tertiary butylhydroquinone,tBHQ)与PFKFB3、S1P2的关系.方法 雄性Sprague Dawley大鼠60只,分为正常对照组(NC组)、DM组和tBHQ组.后两组诱导2型DM模型,其中tBHQ组于造模成功后7d在高脂高糖饲料中添加10g· L-1tBHQ进行干预,DM组大鼠继续使用高脂高糖饲料喂养.于tBHQ干预后4周和12周各组大鼠心脏采血,检测血清空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、空腹血清胰岛素(fasting serum insulin,FINs)含量.采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法定量检测各组大鼠视网膜中PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白及mRNA的分布和表达.采用TUNEL法检测各组大鼠视网膜神经节细胞的凋亡指数.结果 三组大鼠在4周和12周的FPG、FINs总体比较差异均有统计学意义(均为P=0.000).4周和12周时各组中均可见PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白的阳性表达,且主要分布于视网膜神经节细胞层、内核层.免疫组织化学及qRT-PCR检测结果显示,各组大鼠在造模后不同时间点视网膜中PFKFB3、S1P2、VEGF蛋白及mRNA的相对表达量的总体比较差异均有统计学意义(均为P<0.05).4周和12周时,DM组PFKFB3、S1P2、VEGF的表达较NC组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);tBHQ组PFKFB3、S1P2、VEGF的表达较DM组降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).与4周比较,12周时DM组PFKFB3、S1P2、VEGF的蛋白和mRNA表达均增加(均为P<0.05),tBHQ组S1P2蛋白和mRNA的表达较4周降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05).TUNEL法检测结果显示,4周和12周时DM组凋亡指数均较NC组增多,tBHQ组均较DM组减少(均为P<O.05);与4周比较,12周时DM组凋亡指数增高,tBHQ组降低(均为P<O.05).结论 PFKFB3、S1P2及VEGF共同参与2型DM大鼠视网膜的病理过程,其可能是通过PFKFB3/VEGF/S1P2信号途径起作用,并可能与视网膜神经节细胞的凋亡相关;tBHQ对2型DM大鼠视网膜有一定的保护作用.