自噬相关5蛋白对刚地弓形虫刺激树突状细胞成熟的影响

• 作者: 吴以振 吴尚桦 张衡 张静 徐前明 施之强 汪汕 王勇 王桂军 耿娥燕 陆维
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 刚地弓形虫 自噬相关5蛋白 树突状细胞
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 464-468
• 页数: 5页
• 分类号: R382.5
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨自噬相关5 (ATG5)蛋白对刚地弓形虫(简称弓形虫)体外刺激树突状细胞(DCs)成熟的影响. 方法 采用TRIzol法提取昆明小鼠总RNA,反转录为cDNA,经PCR扩增获得ATG5基因.构建重组质粒pET-32a-ATG5,转入大肠埃希菌Rosetta株中表达,尿素纯化后用抗His标签单抗蛋白质印迹(Westernblotting)鉴定ATG5.分离鼠源DCs,用弓形虫体外感染DCs.感染实验分为3组:对照组(仅含DCs)、弓形虫组(弓形虫+ DCs)和ATG5蛋白组(ATG5蛋白+弓形虫+DCs),每组设3次重复,各组弓形虫速殖子(1×104个)同时加入到DCs中,37℃、5％ CO2共培养2h.其中,ATG5蛋白组弓形虫在感染DCs前,预先与ATG5蛋白(50μg)在体外作用2h.采用流式细胞术检测CD11cCD83双表达成熟型DCs在细胞总数中比例的变化,分析DCs的成熟情况,评价ATG5蛋白对弓形虫体外刺激DCs成熟的影响. 结果 ATG5扩增产物约为729 bp,ATG5蛋白相对分子质量(Mr)约为46 000.Western blotting检测结果显示,重组ATG5蛋白具有良好的反应原性.流式细胞术结果显示,对照组、弓形虫组、ATG5蛋白组中CD11cCD83双表达成熟型DCs在细胞总数的比例分别为(13.3±0.5)％、(52.5±0.3)％和(47.8±0.6)％,弓形虫组和ATG5蛋白组差异有统计学意义(P＜0.01),对照组与其他两组的差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 ATG5蛋白可降低弓形虫体外刺激DCs成熟的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐前明		76	309	10.0	14.0
2	王桂军		97	648	13.0	20.0
3	王勇		25	82	4.0	9.0
4	张静		19	65	5.0	6.0
5	吴尚桦		3	1	1.0	1.0
6	耿娥燕		1	0	0.0	0.0
7	张衡		2	1	1.0	1.0
8	施之强		2	1	1.0	1.0
9	汪汕		2	1	1.0	1.0
10	陆维		2	1	1.0	1.0
11	吴以振		2	1	1.0	1.0