Brn-2在人脉络膜黑色素瘤细胞系中的表达及其对MART-1基因启动子活性的影响

• 作者: 周玉梅 王应利 陈冉 陶俊 靳扬扬
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: Brn-2 MART-1基因启动子 脉络膜黑色素瘤细胞系
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 837-841
• 页数: 5页
• 分类号: R773.4
• 字数: 5683字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2018.0198

摘要

目的 探讨黑色素抗原转录子Brn-2在人脉络膜黑色素瘤细胞系中的表达及其对T细胞可识别抗原-1(melanoma antigen recognized by T cells 1,MART-1)启动子活性的影响.方法 采用RT-PCR和Western blot检测人脉络膜黑色素瘤细胞系92-1、92-2、Me1285和Ocm3细胞中Brn-2的mRNA和蛋白表达水平.将含不同长度MART-1基因启动子序列和荧光素酶报告基因的表达质粒pGL3-Luc构建成融合表达载体pGL3-p286-Luc及pGL3-p2956-Luc,与pEV-Brn-2融合表达质粒共转染脉络膜黑色素瘤细胞系细胞.分别测量四种细胞系中p286组、p2956组、p286+ Brn-2组、p2956+ Brn-2组细胞荧光素酶表达变化,并观察Brn-2对上述细胞MART-1基因启动子活性的影响.结果 人脉络膜黑色素瘤细胞系92-1、92-2、Me1285、Ocm3细胞系均可检测到Brn-2 mRNA和蛋白的表达,Brn-2蛋白电泳带大致在相对分子质量47 000处.pGL3-p2956-Luc及pGL3-p286-Luc重组质粒经ApaI和NheI双酶切可切出2956 bp和286 bp 2个条带,pEV-Brn-2重组质粒经EcoRI和BamHI双酶切可切出1329 bp条带.pEV-Brn-2重组质粒分别对人脉络膜黑色素瘤细胞系Ocm3、Me1285、92-2、92-1进行磷酸钙法转染,Western blot检测可见四种细胞系均表达Bin-2蛋白.缺乏Brn-2时,所有细胞的MART-1的p286均显示出活性,MART-1阳性细胞系(92-1、92-2、Ocm3) p286活性高于阴性细胞系(Me1285).p2956活性不同细胞系表现不同,92-1、92-2中较高,Ocm3中其活性与细胞密度相关,MART-1阴性细胞系中p2956近乎无活性.共转染Bin-2后明显下调92-1、92-2、Ocm3中启动子p286及p2956活性(P＜0.05);阴性细胞系Me1285中,Brn-2对启动子活性无影响(P＞0.05).结论 Brn-2表达于人脉络膜黑色素瘤细胞,并下调阳性细胞系MART-1启动子活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王应利	煤炭总医院眼科	10	35	3.0	5.0
2	靳扬扬	煤炭总医院眼科	8	20	3.0	4.0
3	周玉梅	煤炭总医院眼科	11	33	4.0	5.0
4	陶俊	煤炭总医院眼科	2	2	1.0	1.0
5	陈冉	煤炭总医院眼科	1	0	0.0	0.0