StAR基因高表达对DEHP致MCF-7细胞凋亡作用的影响

• 作者: 夏俊杰 彭鹏 徐新云 杨晨 王利 王潮岗 黄奕钦 黄海燕
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯 类固醇合成急性调节蛋白 基因高表达 凋亡基因
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 126-131
• 页数: 6页
• 分类号: R394.6
• 字数: 5493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2018.02.009

摘要

目的:构建类固醇合成急性调节蛋白(StAR)基因高表达载体,建立StAR基因高表达细胞,研究StAR基因高表达对邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)毒性作用的影响.方法:根据GenBank提供的StAR基因cDNA序列设计引物,PCR扩增StAR基因并将其克隆到慢病毒载体中,构建StAR基因高表达MCF-7细胞,通过基因测序、荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞.用不同剂量DEHP染毒MCF-7细胞和StAR基因高表达MCF-7细胞24 h,检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3、Caspase-8在mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:基因测序证明构建的StAR基因高表达载体序列正确,荧光定量PCR检测StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StARmRNA表达水平升高591.9倍(P＜0.01),Western blot实验结果显示,StAR基因转染细胞比正常MCF-7细胞StAR蛋白表达水平升高190％(P＜0.01).不同剂量DEHP染毒StAR基因高表达细胞后,荧光定量PCR结果显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平较对照组(0 mmol/L DEHP)显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).Western blot实验显示,StAR基因高表达细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平比对照组显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:本实验成功构建了StAR基因高表达细胞,DEHP处理后StAR基因高表达细胞的凋亡相关基因表达水平较MCF-7细胞升高,提示StAR基因具有促进DEHP致细胞凋亡作用.