大鼠原代肝星状细胞分离、鉴定及培养方法的研究

• 作者: 周曦 张乾勇 张玉 易龙 糜漫天 马鑫
• 来源期刊: 局解手术学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝星状细胞 细胞分离 原代培养 细胞鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 5-11
• 页数: 7页
• 分类号: R329.447|R575.2
• 字数: 6028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11659/jjssx.09E017036

摘要

目的 改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源.方法 采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定.结果 采用改良方法后,每只大鼠分离收获的HSC细胞稳定在(2.1±0.2)×10 7个,存活率为(96.2±0.8)％,细胞生长状态良好;流式细胞分选测定具有自发荧光特性的HSC细胞所占比例为96.3％,免疫荧光细胞化学法检测分离的HSC细胞表达特征性表面抗原α-SMA和Desmin.结论 采用严格控温、控流、控时的灌注方法及使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液有效提高了大鼠HSC细胞的收获数量、细胞活力和纯度,为进一步围绕HSC开展相关研究奠定了细胞基础.