甘蔗花叶病毒单克隆抗体的制备及其血清学检测应用

• 作者: 吴建祥 周雪平 钱亚娟 饶黎霞 黄德青
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗花叶病毒(SCMV) 单克隆抗体 斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA) 血清学检测
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1989-1995
• 页数: 7页
• 分类号: S643.6|S532
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2018.11.018

摘要

甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是危害玉米(Zea mays)的重要病毒之一,每年造成严重的玉米产量损失.建立特异、灵敏的检测技术是防控SCMV的关键.本研究以提纯的甘蔗花叶病毒云南分离物(Sugarcane mosaic virus Yunnan isolate,SCMV-YN)病毒粒子为免疫原,利用杂交瘤技术获得8株分泌SCMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(12A10、10B11、6A1、19F3、15C12、22A2、21H3和21C12),并制备其单克隆抗体腹水.利用间接酶联免疫吸附试验(indirect-enzyme-linked immunosorbent assay,IndirectELISA)测得8株单克隆抗体腹水的抗体效价为10-6或10-7,单克隆抗体类型均为IgG1、κ轻链.Western blot结果显示,22A2、21H3和6A1杂交瘤细胞株分泌的抗体可识别SCMV北京分离物(Sugarcane mosaic virus Beijing isolate,SCMV-BJ)和SCMV-YN分离物的共同抗原决定簇;12A10、15C12、10B11、21C12和19F3杂交瘤细胞株分泌的抗体仅识别SCMV-YN抗原位点.以制备的单抗隆抗体作为一抗,建立检测SCMV的斑点酶联免疫吸附试验(dot enzyme-linked immunosorbent assay,dot-ELISA),其特异性分析结果显示,以22A2、21H3和6A1单克隆抗体建立的dot-ELISA方法检测SCMV-YN和SCMV-BJ分离物都呈阳性,以12A10、19F3、10B11、21C12和15C12单克隆抗体建立的dot-ELISA方法检测SCMV-YN分离物呈阳性反应,检测SCMV-BJ分离物呈阴性反应.该结果表明,上述5个单克隆抗体可用于SCMV-YN分离物的检测和株系鉴定.以不同细胞株单克隆抗体建立dot-ELISA方法检测感染SCMV的病叶,其灵敏度分析结果显示,15C12、10B11、21H3和6A1单克隆抗体检测病叶的最高稀释倍数达到1∶10 240 (W/V,g/mL),19F3和12A10单抗隆抗体检测病叶的最高稀释倍数均为1∶5 120,22A2和21C12单抗隆抗体检测病叶的最高稀释倍数为1∶2 560.本研究制备了SCMV单克隆抗体并建立了dot-ELISA血清学检测方法,为我国作物上SCMV的检测与诊断、株系鉴定、抗病育种以及科学防控提供了技术支撑.