不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及机制

• 作者: 吴绵绵 姜静 张琰 房健民 李慎军 谷中秀 赵少贞 郭芳 黄敏
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 视网膜新生血管 诱饵型受体 碱性成纤维细胞生长因子 血管内皮生长因子 重组蛋白质药物
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 581-589
• 页数: 9页
• 字数: 9596字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2018.08.002

摘要

目的 探讨不同批次的重组诱饵型受体创新药物RC28-E1与RC28-E2对视网膜新生血管的药效学比较及作用机制. 方法 选取健康清洁级4日龄C57BL/6J幼鼠60只,应用随机数字表法随机分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)+成纤维细胞生长因子2(FGF2)组、VEGF+FGF2 +RC28-E1组、VEGF+FGF2+ RC28-E2组、VEGF+FGF2+conbercept组、VEGF+FGF2+FGF trap组,每组10只.取各组视网膜组织块构建培养体系,加入用饥饿培养基配置的相应因子和药物刺激,正常对照组加饥饿培养基.将各组视网膜组织块进行植物凝集素(Isolectin B4)染色并拍照,计算各组单位血管长度下视网膜血管顶细胞分叉的数量.另选96只健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠,应用随机数字表法随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型对照组、OIR+RC28-E1组、OIR+RC28-E2组、OIR+conbercept组和OIR+FGF trap组,每组16只.正常对照组在常氧下饲养10d,其余各组在高氧环境中饲养5d后在常氧状态下再饲养5d.各组取17日龄鼠视网膜进行Isolectin B4染色并拍照,用计算机软件分析视网膜相对无灌注区面积和新生血管像素.Western blot法检测OIR实验各组视网膜中VEGF和FGF2的蛋白水平.最后,在VEGF和FGF2刺激下的视网膜血管内皮细胞(RF/6A)中,检测给予RC28-E1、conbercept以及FGF trap处理后,细胞的MEK-细胞外调节蛋白激酶(Erk)、蛋白激酶C(PKC)以及蛋白激酶B(Akt)信号传导通路的活性变化.结果 视网膜组织块研究结果显示,VEGF+FGF2+ RC28-E1组、VEGF+ FGF2+ RC28-E2组、VEGF+ FGF2+ conbercept组和VEGF+ FGF2+ FGFtrap组中单位血管长度的顶细胞分叉数目均明显少于VEGF+FGF2组,差异均有统计学意义(均P＜0.001),其中RC28-E1组与RC28-E2组的血管顶细胞分叉数量相似,差异无统计学意义(P=0.15),但均明显少于VEGF+FGF2+conbercept组和VEGF+FGF2+FGF trap组,差异均有统计学意义(均P＜0.001).OIR模型对照组无灌注区相对面积明显大于各药物干预组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),OIR+RC28-E1组与OIR+RC28-E2组视网膜无灌注区相对面积的比较,差异无统计学意义(P=0.17),但二者明显小于OIR+conbercept组和OIR+FGF trap组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各干预组新生血管的相对像素值明显低于OIR模型对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.001),OIR+RC28-E1组视网膜新生血管的相对像素值明显低于VEGF+FGF2 +conbercept组和VEGF+FGF2+FGF trap组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),但与OIR+RC28-E2组相比,差异无统计学意义(P=0.39).Western blot结果显示,OIR小鼠视网膜中VEGF和FGF2的蛋白表达均较正常对照组显著上调,差异均有统计学意义(均P＜0.001),而RC28-E1和RC28-E2可使其降至正常水平.VEGF和FGF2可诱导RF/6A细胞中的MEK-Erk通路活性增强,而RC28-E1可显著抑制这一通路的过度激活. 结论 RC28-E1和RC28-E2可在初生小鼠视网膜组织块中抑制血管生成,并减少OIR小鼠模型中视网膜的无灌注区,减轻新生血管生成.药理批次和中试批次的RC28-E在体内外模型中的效果相当,稳定性可靠,且优于临床同类药物conbercept和FGF trap.RC28-E1可能是通过抑制视网膜血管内皮细胞中MEK-Erk通路的过度激活而达到抑制病理性新生血管生成的效果的.