C基因型多重耐药乙型肝炎病毒稳定复制表达小鼠模型的建立

• 作者: 余双庆 刘妍 刘新光 刘璐洁 吴小兵 徐东平 杨悦 董小岩 许智慧 赵丽
• 来源期刊: 传染病信息
• 学科: 医学
• 关键词: 多重耐药突变 乙型肝炎病毒 病毒复制 抗原表达 小鼠模型
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 532-536
• 页数: 5页
• 分类号: R373.2
• 字数: 4310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-8134.2018.06.009

摘要

目的 建立高嗜肝性重组8型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 8,rAAV8)介导的C基因型多重耐药乙型肝炎病毒(multidrug resistant hepatitis B virus,MDR HBV)稳定复制表达小鼠模型.方法 分别构建rAAV8-1.3倍C基因型多重耐药型(HBV逆转录酶区含有rtL180M+S202G+M204V+N236T位点)和野生型HBV重组质粒,然后包装纯化并筛选高滴度重组病毒(rAAV8-1.3HBV-C-MDR和rAAV8-1.3HBV-C-WT),将病毒经尾静脉注射至6～8周龄的C57BL/6小鼠,建立C基因型多重耐药型(实验组,n=6)和野生型(对照组,n=6)HBV稳定复制表达小鼠模型,监测病毒复制和抗原表达至9周并于第9周末处死小鼠,取肝脏组织进行HE染色和免疫组化染色,观察肝组织病理改变并分析HBsAg和HBcAg的表达.结果 小鼠注射重组病毒后第2、3、5、7、9周,血清HBV DNA表达较稳定,实验组和对照组小鼠血清HBV DNA波动范围分别为3.67～4.06 lg IU/ml和4.36～5.11 lg IU/ml.血清HBsAg和HBeAg在观察期间均高表达,第2周实验组和对照组血清HBsAg和HBeAg OD值分别为3.501±0.230和2.989±0.250,3.967±0.230和3.384±0.230.2组小鼠肝组织未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常,但可检测到HBsAg和HBcAg蛋白表达.结论 利用高嗜肝性rAAV8载体携带1.3倍C基因型MDR HBV基因组体内转导C57BL/6小鼠,成功建立了稳定复制并持续表达C基因型MDR HBV的小鼠模型,为后续评价抗MDR HBV药物疗效提供实验平台.