建立人α突触核蛋白A30P突变的帕金森病大鼠模型

• 作者: 余建 宋娜 张伟 张景航 李宏彬 李雨姗 王海军 胡庆 苏蔚 谷腾腾 赵铁锁 邵明龙
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: α-突触核蛋白 A30P 慢病毒表达载体 帕金森病 大鼠
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 567-573
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4481字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2018.05.005

摘要

目的 建立人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型.方法 利用慢病毒系统构建过表达野生型α-SYN载体pLKO-CMV-α-SYN-WT-P2A-GFP及α-SYN A30P突变载体pLKO-CMV-α-SYN-A30P-P2A-GFP,分别转染293FT细胞,瞬时转染24 h后WB检测α-SYN的表达水平.之后经慢病毒包装、浓缩,利用立体定位技术分别对大鼠中脑黑质致密部注射病毒稀释液,过表达α-SYN野生型和A30P突变型的慢病毒颗粒.免疫荧光染色检测α-SYN和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的分布情况,并观察中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的变化.Rotating rod实验评价注射A30P慢病毒大鼠的行为改变情况.结果 野生型和突变型A30P的基因表达载体在293FT细胞内能够高表达α-SYN蛋白.TH免疫荧光结果显示:与病毒稀释液组相比,过表达α-SYN野生型和A30P突变型大鼠均能导致中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的减少,而α-SYN A30P慢病毒注射组的中脑黑质神经元缺失的更多,具有显著性差异.对A30P转基因大鼠脑部神经元缺失部位进行免疫荧光发现,该区域TH染色几乎呈阴性,α-SYN蛋白出现大量聚集,该结果表明脑部神经元的消失同时伴随着α-SYN蛋白的聚集及TH表达的剧烈减少,进一步揭示过表达α-SYN A30P可以导致多巴胺能神经元数量的减少和退化.此外,rotating rod实验结果显示过表达α-SYN A30P大鼠表现出明显的进行性运动能力障碍.结论 通过慢病毒系统建立了人α-SYN A30P突变型转基因大鼠的PD模型,为PD发病机制的研究及药物开发奠定基础.