犬骨髓基质细胞矿化不同阶段对犬牙周膜干细胞增殖和分化的影响

• 作者: 张志宏 金振宇
• 来源期刊: 口腔疾病防治
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓基质细胞 牙周膜干细胞 条件培养液 矿化 成骨分化
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 699-705
• 页数: 7页
• 分类号: R781.4
• 字数: 5093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12016/j.issn.2096-1456.2018.11.003

摘要

目的 观察矿化不同阶段犬髂骨骨髓基质细胞(iliac bone marrow stromal cells,I-BMSCs)条件培养液对犬牙周膜干细胞(canine periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖和分化的影响,为分析骨髓基质细胞调控牙周膜干细胞的生物学行为奠定基础.方法 体外培养犬骨髓基质细胞和流式细胞术分选纯化PDLSCs.取第三代PDLSCs,分别加入髂骨骨髓基质细胞矿化条件培养液(iliac bone marrow stromal cells conditioned medium,I-BMSCs-CM)行间接共培养PDLSCs.Control组:单纯的未诱导的PDLSCs,用含15％FBS的DMEM培养液常规培养;实验组为I-BMSCs-CM组、I-BMSCs-CM-10ds组、I-BMSCs-CM-15ds组.I-BMSCs-CM组:I-BMSCs诱导的PDLSCs;I-BMSCs-CM-10ds组:成骨诱导10 d的I-BMSCs诱导的PDLSCs;I-BMSCs-CM-15ds组:成骨诱导15d的I-BMSCs诱导的PDLSCs.MTT法绘制细胞增殖曲线;qRT-PCR检测PDLSCs成骨分化相关基因的表达:特异AT序列结合蛋白2(special AT-rich sequence binding protein 2,Satb2)、核心结合因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨钙素(osteocalcin,OCN);Western blot检测Satb2、Runx2和OCN蛋白表达变化.结果 PDLSCs呈长梭形,表达波形丝蛋白,具备成骨及脂向分化能力.生长曲线显示I-BMSCs能促进PDLSCs的增殖,I-BMSCs-CM-15ds促进PDLSCs增殖最为明显(F=342.8,P=0.017).qRT-PCR和Western blot均能检测到PDLSCs的Satb2、Runx2和OCN的表达,第7天时实验组的PDLSCs的Satb2、Runx2和OCN的表达均高于对照组.I-BMSCs-CM-15ds上调PDLSCs的Satb2、Runx2、OCN蛋白表达最为显著,分别是Control组的3.04倍(Fsath2=24.48,P=0.014)、5.1倍(FRunx2=12.25,P＜0.001)和3.67倍(FOCN=18.35,P=0.022).结论 矿化程度较高的I-BMSCs更能促进PDLSCs增殖和向成骨样细胞分化,提示终末分化骨细胞可能诱发了PDLSCs的成骨分化.