机械敏感离子通道Trpm7在LIPUS促进牙髓间充质干细胞成骨分化中的作用机制的研究

• 作者: 吴梦云 姚欢 李娅莎 杨珂 潘华锋 章杰 郑妍
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 低强度脉冲超声 人牙髓间充质干细胞 Trpm7 成骨分化
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1518-1525
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.09.0129

摘要

该文主要研究低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进牙髓间充质干细胞(dental pulp mesenchymal stem cells,DPSCs)成骨分化,以及瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在其中发挥的作用.培养人DPSCs,流式细胞术检测其表面分子标志表达,阿利新蓝、茜素红及油红O染色检测其成软骨、成骨和成脂分化能力.ALP活性、ALP染色和茜素红染色观察LIPUS促成骨分化的能力.实时定量PCR检测LIPUS处理组与对照组成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2表达的差异以及不同时间点两组Trpm7 mRNA表达水平的变化.ALP活性检测LIPUS及不同浓度Trpm7抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-aminoethoxy-diphenyl borate,2-APB)对成骨分化能力的影响.实验分为对照组、LIPUS组、LIPUS+-二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+2-APB组,ALP和茜素红染色观察各组成骨分化能力,Western blot检测各组OPN、OCN和RUNX2的蛋白表达.结果显示,成功培养DPSCs,LIPUS处理后ALP和茜素红阳性染色明显增多,ALP活性增强(P＜0.01);OPN、OCN、RUNX2的mRNA表达水平显著增加(P＜0.05),LIPUS处理第2天和第5天Trpm7的mRNA表达水平有明显升高(P＜0.05).2-APB作用后明显下调ALP活性(P＜0.O1).LIPUS组、LIPUS+DMSO组与对照组相比,ALP和茜素红阳性染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达均显著增加,而LIPUS+2-APB组较于LIPUS+DMSO组,ALP和茜素红染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达明显降低.该研究结果提示,LIPUS能够促进DPSCs的成骨分化,且Trpm7在这一过程中发挥着重要作用.