羊传染性脓疱病毒ORF047基因表达及其蛋白在细胞中的定位分析

• 作者: 何小兵 景志忠 王春燕 贾怀杰 金启旺 陈国华
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 羊传染性脓疱病毒 ORF047基因 定位
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-132
• 页数: 4页
• 分类号: R373
• 字数: 3246字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.015

摘要

目的 克隆羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV) ORF047基因,并进行真核表达及亚细胞定位,为筛选与其相互作用的蛋白提供依据.方法 提取羊传染性脓疱病毒分离株的DNA,以其为模板,参照OV-SA00毒株(NC-005336.1)基因ORF047序列,采用PCR技术扩增ORFV ORF047基因片段,凝胶回收后将其插入pEGFP-N1载体,构建重组质粒pEGFP-ORF047,测序后重组质粒共转染293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达.后将重组质粒pEGFP-ORF047与pH-cRed1-Nuc、pHCRed1-mito、pHeRed1-ER分别共转染Vero-E6细胞,通过激光共聚焦显微镜对融合蛋白进行亚细胞定位分析.结果 ORFV ORF047基因片段大小为735 bp;重组质粒pEGFP-ORF047能够在293 T细胞中明显表达融合有目的分子的绿色荧光蛋白,Western blotting检测表达的融合蛋白大小约54 kD;亚细胞定位分析表明,ORF047蛋白主要定位于胞浆中,少量在线粒体中.结论 成功分析了ORF047基因的表达与其蛋白在亚细胞定位.