PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用

• 作者: 刘珂 张彦兵 李玉明 李蓓蓓 相笑 石元元 童光志 邱亚峰 邵东华 马志永 魏建超
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白 抗原肽 抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 19-24
• 页数: 6页
• 分类号: S852.43
• 字数: 3800字
• 语种: 中文

摘要

基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用.本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体.首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽.通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守.其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上.随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体.最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过105;Western blot结果显示,该抗体(1:2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1:100)可以检测PRRSV感染的细胞.因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具.