冷诱导RNA结合蛋白促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用

• 作者: 张松 曾欢欢 李子健 汪一 黄英如
• 来源期刊: 中国康复理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 周围神经损伤 冷诱导RNA结合蛋白 冷冻保存 同种异体移植 神经再生
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 391-400
• 页数: 10页
• 分类号: R745
• 字数: 6649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9771.2018.04.004

摘要

目的 探讨冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)对冷冻保存大鼠坐骨神经活性及同种异体移植后神经再生的影响.方法 将15 mm雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经片段置于DMEM溶液中,分别在4℃、15℃、32℃预处理24 h(A组、B组、C组),设置新鲜神经组(D组).RT-PCR和Western blotting检测CIRP mRNA和蛋白表达.将上述4组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周,Calcein-AM/PI荧光染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞、死细胞情况,Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达.取冷冻保存4周的坐骨神经,37℃、5% CO2培养7 d,Western blotting检测神经生长因子(NGF)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)蛋白表达;用冷冻保存4周或新鲜雄性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经,修复对应的雄性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组),设立同系移植新鲜组(F′组).术后4周,免疫组化染色观察移植段神经CD4+T淋巴细胞入侵,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平;术后20周,电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和运动神经传导速度(MNCV),甲苯胺蓝染色分析再生有髓神经纤维数目和髓鞘厚度,电镜观察再生神经超微结构.结果 C组神经CIRP mRNA及蛋白表达均高于A组和B组(P<0.05).冷冻保存4周后,与A组、B组、D组相比,C组神经活细胞数量较多,Bax表达降低(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05);C组冷冻保存神经分泌NGF、GDNF表达均高于A组和B组(P<0.05).同种异体移植术后4周,与E′组相比,C′组CD4+T淋巴细胞减少,血清IL-6、IFN-γ水平降低(P<0.05),但C′组与D′组和F′组比较无显著性差异(P>0.05).术后20周,C′组CMAP、MNCV、再生神经轴突密度及髓鞘厚度均优于A′、B′、D′组和E′组(P<0.05).再生神经超微结构显示,与A′组、B′组、D′组和E′组相比,C′、F′组有髓神经纤维数量多,粗细均匀,分布广泛,髓鞘厚.结论32℃预处理可促进坐骨神经CIRP高表达,CIRP高表达对冷冻保存大鼠坐骨神经具有保护作用,能维持保存后神经的生物活性,促进同种异体移植后受体神经再生.