摘要:
目的 研究地塞米松 (dexamethasone, Dex) 对大鼠成骨细胞功能及Akt磷酸化的影响.方法 取新生 SD 大鼠颅骨体外分离培养的成骨细胞, 根据地塞米松作用浓度分为对照组 ( 0 mol/L Dex)、10-8mol/L Dex组、 10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组 干预24 h; 应用Akt激动剂SC79进一步验证地塞米松对成骨细胞增生和功能的影响, 分为对照组 ( 0 mol/L Dex, 0 mol/L SC79)、 SC79 组 ( 0 mol/L Dex, 10 μmol/L SC79)、 Dex组 (10-6mol/L Dex, 0 mol/L SC79)、 SC79+Dex组 (10 μmol/L SC79, 10-6mol/L Dex)干预24 h.培养结束后, 运用Cell Counting Kit-8法检测细胞增生活力, 碱性磷酸酶 ( alkaline phosphatase, ALP) 试剂盒检测成骨细胞上清液中ALP的含量, Western blot法检测成骨细胞中ALP、 Akt、 p-Akt蛋白表达.结果 (1) 与对照组相比, 10-7mol/L、 10-6mol/L Dex组的细胞增生活性均明显下降 ( A值分别为0. 742± 0. 022、 0. 598±0. 028、 0. 570±0. 025 ), 差异有统计学意义 (P<0. 05). 10-8mol/L地塞米松对成骨细胞增生抑制不明显 (P>0. 05); (2) 除10-8mol/L Dex组外, 10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组上清液中ALP含量均显著低于对照组 (ALP活性值分别为0. 316±0. 015、 0. 313±0. 013、 0. 351±0. 028), 差异有统计学意义 (P<0. 05); (3) 在10-8mol/L、 10-7mol/L、 10-6mol/L地塞米松作用下, 成骨细胞p-Akt蛋白表达较对照组分别减少16. 9%、 34. 9%、 62. 5%, 差异有统计学意义 (均P<0. 05), ALP蛋白分别减少16. 2%、 24. 8%、 69. 3%, 其中10-7mol/L Dex组、 10-6mol/L Dex组与对照组比较, 差异有统计学意义 (P<0. 05); (4) 与对照组相比, 10 μmol/L SC79刺激p-Akt蛋白的表达, 对ALP蛋白的表达具有促进作用 (P<0. 05); 与Dex组相比, SC79+Dex组成骨细胞增生活力及ALP活性明显升高, p-Akt、 ALP蛋白表达明显增加, 差异有统计学意义 (P<0. 05).结论 高浓度地塞米松可以抑制成骨细胞增生和ALP的表达, 其作用机制可能与下调Akt磷酸化有关.