摘要:
目的 研究长链非编码RNA(LncRNA)TapSAKI对缺氧损伤肾小管上皮细胞HK-2细胞的影响.方法 将体外培养的HK-2细胞分为常氧组(A组)、缺氧损伤组(B组)、缺氧损伤+control siRNA组(C组)、缺氧损伤+TapSAKI siRNA组(D组).采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测TapSAKI表达变化;CCK-8检测各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot检测周期相关蛋白CyclinD1、CDK2和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平.结果 qPCR结果显示,与A组比较,B组TapSAKI基因表达增加(48.92 ± 0.31比1.00 ± 0.01,P<0.05);与C组比较,D组TapSAKI基因表达降低(4.70 ± 0.60比48.31 ± 0.29,P<0.05).CCK-8结果显示,与A组比较,B组的增殖降低(P<0.05);与C组比较,D组TapSAKI siRNA干扰后增殖升高(P<0.05).流式细胞仪检测结果表明,与A组比较,B组凋亡率升高[(26.38 ± 1.21)%比(6.45 ± 0.46)%,P<0.05];与 C组比较,D组凋亡率显著降低[(10.98 ± 0.88)%比(21.59 ± 1.30)%,P<0.05].Western blot检测Bax、Bcl-2的蛋白表达,与A组比较,B组的Bax表达升高,Bcl-2表达减低(1.304 ± 0.082比0.411 ± 0.002、0.390 ± 0.007比1.027 ± 0.022,均P<0.05);与C组比较,D组Bax表达减低,Bcl-2表达升高,差异均有统计学意义(0.655 ± 0.819比1.419 ± 0.087,0.819 ± 0.034比0.437 ± 0.014,均P<0.05).与A组比较,B组G0/G1期细胞所占比例显著增加(69.82 ± 1.14比34.46 ± 0.82,P<0.05),S期细胞占的比例显著减少(11.6 ± 0.60比42.23 ± 1.46,P<0.05).与A组比较,B组CyclinD1和CDK2蛋白表达减低(0.659 ± 0.062比1.723 ± 0.084,0.414 ± 0.015比0.87 ± 0.031,均P<0.05);与C组比较,D组G0/G1期细胞所占比例明显减少(30.77 ± 0.33比61.81 ± 1.50,P<0.05),S期细胞占的比例明显增加(40.32 ± 0.72比17.92 ± 0.71, P<0.05),CyclinD1和CDK2蛋白表达增加(2.049 ± 0.027比0.626 ± 0.024,0.89 ± 0.104比0.424 ± 0.012,均P<0.05).结论 在缺氧条件下,LncRNA TapSAKI在肾小管上皮细胞表达丰富,引起肾小管上皮细胞增殖缓慢,凋亡增加,提示LncRNA TapSAKI可通过影响细胞的增殖和凋亡参与疾病的恶化.