shRNA-Piezo1对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制

• 作者: 张扬 谭洪宇 赵亮
• 来源期刊: 中国脊柱脊髓杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 髓核细胞 Piezo1蛋白 shRNA干扰 牵张应力 凋亡
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1125-1132
• 页数: 8页
• 分类号: R681.5|R363.2
• 字数: 5263字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-406X.2018.12.11

摘要

目的:探讨短发夹RNA沉默压电离子蛋白1编码基因(shRNA-Piezo1)对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制.方法:取8例腰椎间突出症患者术中摘取的椎间盘组织(改良Pfirrmann分级为Ⅱ级或Ⅲ级),分别分离培养髓核细胞,取第2代髓核细胞构建体外机械牵张应力模型;利用293T细胞作为慢病毒感染靶细胞,检测最适慢病毒滴度,用最适滴度慢病毒感染髓核细胞;应用RT-PCR和Western-Blot法筛选出有效干扰序列,利用shRNA干扰技术构建shRNA-Piezo1干扰质粒;根据预实验处理结果,将细胞分成4组:空白对照组(取第2代髓核细胞不做机械牵张应力处理),牵张应力组(取第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA阴性对照组(空白载体质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA干扰组(shRNA-Piezo1干扰质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),应用Fluo3-AM试剂盒检测4组细胞的细胞质Ca2+水平;Cell Meter检测试剂盒检测4组细胞中线粒体膜电位的变化;AnnexinV-FITC试剂盒检测4组细胞的凋亡率.结果:(1)分离培养的细胞Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan蛋白表达阳性,符合髓核细胞特征.(2)当髓核细胞转染复数(MOI)=50时,慢病毒滴度为1×108TU/ml转染效率最高.(3)homo-3201序列为shRNA-Piezo1的有效序列.(4)4组髓核细胞细胞质Ca2+含量、线粒体膜电位翻转比例和细胞凋亡率有显著性差异(P＜0.05),空白组与shRNA阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05);shRNA干扰组与牵张应力组和shRNA阴性对照组比较均显著性减少(P＜0.05),与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:shRNA-Piezo1可以抑制异常机械牵张应力作用下髓核细胞的过度凋亡,而且是通过抑制细胞质Ca2+水平和线粒体膜电位翻转来实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵亮	郑州大学第一附属医院骨科	70	235	8.0	12.0
2	张扬	郑州大学第一附属医院骨科	22	53	5.0	7.0
3	谭洪宇	郑州大学第一附属医院骨科	53	166	6.0	10.0