重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体

• 作者: 向花花 周晶 张宏全 彭华 董巍檑 郭紫芬 龚咏晴
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: EGFR基因 载体构建 宫颈癌 重叠PCR
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 139-141,147
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2018.02.17

摘要

目的 构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组pMD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板.方法 以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon 18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon 18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon1 8-exon20片段插入pMD19-T质粒,构建成野生型pMD19-exon1 8-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon1 8-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致.结论 利用重叠PCR法将exon 18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体.